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制備色譜儀的相關介紹
點擊次數:2075 更新時間:2022-06-30
高速逆流色譜是一種連續高效的液—液分配色譜分離技術, 它不用任何固態的支撐物或載體。 它利用兩相溶劑體系在高速旋轉的螺旋管內建立起一種**的單向性流體動力學平衡,當其中一相作為固定相,另一相作為流動相,在連續洗脫的過程中能保留大量固定相。
由于不需要固體支撐體,物質的分離依據其在兩相中分配系數的不同而實現,因而避免了因不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等,不僅使樣品能夠全部回收,回收的樣品更能反映其本來的特性,適合于天然生物活性成分的分離。而且由于被分離物質與液態固定相之間能夠充分接觸,使得樣品的制備量大大提高,是一種理想的制備分離手段。
它相對于傳統的固—液柱色譜技術,具有適用范圍廣、操作靈活、高效、快速、制備量大、費用低等優點。HSCCC 技術正在發展成為一種備受關注的新型分離純化技術,已經廣泛應用于生物醫藥、天然產物、食品和化妝品等領域, 在天然產物行業中已被認為是一種有效的分離技術;適合于中小分子類物質的分離純化。
制備色譜儀比較常用的是制備薄層板色譜、制備離心薄層色譜、制備干柱薄層色譜三個類別。
1、 制備薄層板色譜
制備板:一般使用200X200mm的薄層色譜板,吸附劑厚度為0.5~1mm,一般不超過2m,平均1mm厚需要的硅膠量為15~20g。為了得到低成本、鋪層均勻的高質量制備薄層板,建議使用上??普芄镜腡D-II型全自動制備薄層鋪板機。
點樣:制備薄層分離的樣品量大,一般采用條帶點樣、不使用圓點點樣;一般1mm厚的硅膠*大約100mg,樣品濃度不宜太稀,應在2~10%為宜。為了得到均勻而規則的點樣結果,建議使用上??普芄镜腟P-3型電動薄層條帶點樣器。同時展開劑的用量比較大,點樣位置要比較高
展開:薄層色譜層析缸要充分飽和,如制備板數量較多,請選用上??普芄镜闹苽浔影寮?;
顯色:一般使用紫外燈或碘蒸汽等非破壞方式顯色,或在板邊緣進行化學試劑顯色;
回收:將檢測到的樣品連同硅膠一齊刮下,防入砂芯漏斗,使用適當溶劑將組分洗脫,將洗脫溶劑蒸干即可。一般希望洗脫溶劑沸點較低,不與組分發生反應。
制備薄層板色譜優點是使用方便、便宜、節省人力,缺點是分離時間較長。
2、 制備離心薄層色譜
與普通制備板有三個不同點:
首先:色譜板是圓的,是徑向色譜,分離能力優于方板;
其次:洗脫液的流動不靠毛細現象,靠離心力,減少了分離時間與脫尾,分離效能很高;
后:洗脫液是連續流動的,可以非常容易的形成梯度,并且不需要刮下吸附層,這樣可以使色譜板可以反復使用;
所以,制備離心薄層色譜的分離效能與分離速度要遠高于制備薄層板色譜,建議采用上海公司科哲公司的KH-CTLC型制備離心薄層色譜儀。
3、制備干柱薄層色譜
可以看作棒狀的薄層色譜,優點是簡單易行,快速經濟、制備量大。缺點是必須使用可透紫外的管材,而且在收集樣品時要割斷管材,使費用略高。上??普芄咎峁S玫谋由V柱。本方法與真空系統聯用,構成減壓真空色譜,性能會得到進一步提升。 
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